Redistribution de fluorescence après photoblanchiment

La redistribution de fluorescence après photoblanchiment est une méthode utilisée en microscopie à fluorescence pour mesurer la vitesse de diffusion moléculaire.



Catégories :

Biophysique - Méthode de la biochimie - Imagerie cellulaire - Histologie - Mesure physique - Métrologie

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  • Le FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) est une méthode utilisée... Une redistribution des 2 populations entre la zone bleachée et le milieu... la quantité de fluorescence effectivement récupérée après photoblanchiment, ... (source : cbm.cnrs-orleans)
  • moléculaire par la méthode de FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) en .... ce cœfficient, à partir des courbes de redistribution de la fluorescence après..... distribution de Fluorescence Après Photoblanchiment.... de la zone photoblanchie (extraite à partir de la ligne jaune sur la stack)... (source : pict-ibisa.curie)
  • après photoblanchiment (FRAP) 2 une lamine fluorescente (A ou B) ne... molécules d'intérêt marquées. En effet, celles localisées autour de la zone... reste lié à l'enveloppe nucléaire : en effet, la redistribution de la fluorescence après... (source : tel.archives-ouvertes)

Définition

La redistribution de fluorescence après photoblanchiment (pour fluorescence recovery after photobleaching, FRAP) est une méthode utilisée en microscopie à fluorescence pour mesurer la vitesse de diffusion moléculaire. Elle peut être appliquée pour étudier la mobilité moléculaire dans des cellules vivantes.

Principe

Principe de la méthode FRAP

Quand on a une distribution homogène d'une population moléculaire fluorescente, on peut inhiber de manière irréversible sa fluorescence dans une zone restreinte de l'échantillon par photoblanchiment avec un flash lumineux obtenu en exposant particulièrement brièvement cette zone avec un laser. On crée ainsi deux populations de molécules (une fluorescente l'autre pas) spatialement différentes. Si les molécules sont capables de se déplacer dans le milieu, on assiste à une redistribution des deux populations entre la zone blanchie et le milieu adjacent jusqu'à l'homogénéisation des populations : la zone blanchie -- ou bleachée -- redevient progressivement fluorescente. L'analyse de la cinétique de récupération de fluorescence sert à déduire le cœfficient de diffusion latérale «D», caractéristique de la vitesse de déplacement des molécules dans le milieu (plus la vitesse de diffusion est élevée plus la fluorescence ré-augmente rapidement).


Le FLIP (Fluorescence Loss Induced by Photobleaching) est une autre manière d'étudier la mobilité moléculaire. Dans ce cas on réalise des bleaching répétitifs sur une zone ou sur un point, jusqu'à ce que la fluorescence ait entièrement disparu ou ne fluctue plus. Le FLIP sert à mettre en évidence des continuités dans les structures cellulaires.

Ces deux méthodes sont le plus souvent réalisées en microscopie confocale ou en Microscopie de fluorescence par excitation multiphotonique.

Applications

Remarques

FRAP est aussi parfois traduit par "Récupération de Fluorescence Après Photoblanchiment" ou encore par "Recouvrement de Fluorescence Après Photoblanchiment".

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